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6.
具核梭杆菌来源的外膜囊泡对口腔上皮细胞闭合蛋白Claudin-4表达的影响
杨成龙, 杨蒙, 王宇峰, 宋晨成, 杜观环, 唐国瑶
上海口腔医学
2023, 32 (2):
126-131.
DOI: 10.19439/j.sjos.2023.02.003
目的: 探讨具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum, F.n)分泌的外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)对人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOK)闭合蛋白Claudin-4表达及其对口腔上皮屏障功能的影响。方法: 厌氧条件下培养具核梭杆菌,透析法提取OMVs。采用Nanosight及透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)对提取的OMVs进行表征分析。OMVs以不同质量浓度(0~100 μg/mL)刺激HOK 12 h ,并以100 μg/mL OMVs刺激HOK 6、12 h,采用实时转录PCR和蛋白质印迹法分析闭合蛋白Claudin-4在基因和蛋白水平的表达;倒置荧光显微镜观察HOK与OMVs共定位以及Claudin-4蛋白的定位分布。利用Transwell上室体外构建人口腔上皮屏障,采用跨膜电阻测量仪(EVOM2)检测屏障跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance, TER),以异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD-4)渗透率评估屏障通透性。采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与对照组相比,OMVs刺激组HOK中Claudin-4在蛋白水平和基因水平表达均显著降低(P<0.05)。免疫荧光显示,细胞间Claudin-4的荧光连续性表达被破坏。与对照组相比,OMVs刺激可降低口腔上皮屏障的TER值(P<0.05),提高FD-4的透过率(P<0.05)。结论: 具核梭杆菌来源的OMVs能通过抑制闭合蛋白Claudin-4表达,损伤口腔黏膜上皮的屏障功能。
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